關(guān)鍵詞:MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://handsem.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，在活細(xì)胞中作用于線粒體的呼吸鏈，MTT在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下生成藍(lán)色的formazan結(jié)晶，formazan結(jié)晶的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，生成的formazan結(jié)晶可溶解在DMSO中，利用酶標(biāo)儀測定570 nm處的光密度OD值，可以反映出活細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞活力。死細(xì)胞中由于沒有琥珀酸脫氫酶，因此不能還原MTT生成formazan結(jié)晶。
優(yōu)點：經(jīng)濟、靈敏度高，可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
缺點：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的formazan結(jié)晶產(chǎn)物不溶于水，需有機溶劑溶解后才能檢測，這不僅使工作量增加，也會對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且有機溶劑對實驗人員也有損害。
①將對數(shù)生長期的細(xì)胞濃度調(diào)整為1~10×104細(xì)胞/ml，按103~104個細(xì)胞接種于96孔板，每孔100 μl；
②培養(yǎng)細(xì)胞24小時后，對其進(jìn)行不同處理，每個處理設(shè)三個平行對照；
③（MTT法）適當(dāng)培養(yǎng)時間后，取出細(xì)胞，倒掉培養(yǎng)液，每孔加入5 mg/ml新鮮配制的MTT溶液，溫育4小時，再次倒掉上清液，每孔加入200 ml DMSO，搖勻后，酶標(biāo)儀檢測吸光值。
③（臺盼藍(lán)拒染法）適當(dāng)培養(yǎng)時間后，收集細(xì)胞，經(jīng)臺盼藍(lán)染色，在倒置顯微鏡下計數(shù)藍(lán)染及不染色細(xì)胞，計算細(xì)胞存活率。
操作步驟：
1、無菌條件下取新生**的SD大鼠DRG。
2、鏡下去除神經(jīng)根和外膜，接種于預(yù)先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中，每孔1個DRG。
3、待DRG貼壁后加入100μl無血清L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基，實驗組加入純化的表達(dá)蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對照加入等體積的溶解表達(dá)蛋白的溶劑。
4、37℃ 5%CO2培養(yǎng)，每天在Olympus倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長情況，并進(jìn)行測量，其數(shù)據(jù)作統(tǒng)計分析。
注意事項
1、選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度。
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。
3、設(shè)空白對照：與試驗平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，*后比色以空白調(diào)零。
MTT實驗吸光度*后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關(guān)系,IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)作圖，然后得到50％抑制率時候的藥品濃度，就是IC50。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度.