人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA Kit

人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA Kit

● 試劑盒操作步驟如下： ● 1.用TBS或PBS制備蛋白樣品的稀釋液。稀釋度要取決于樣品中存在的抗原濃度。由于抗原濃度通常未知，因此有必要檢測(cè)寬范圍的稀釋度。 2.制備硝酸纖維素膜，用鉛筆標(biāo)上每個(gè)待測(cè)一抗/二抗的濃度。所需轉(zhuǎn)印膜的數(shù)量取決于待篩查的一抗和/或二抗有多少種不同的稀釋濃度。通常來(lái)說(shuō)，一抗要檢測(cè)一到兩個(gè)稀釋度，而二抗要檢測(cè)兩到三個(gè)稀釋度。 3.將硝酸纖維素膜放在濾紙上,將抗原稀釋液點(diǎn)在膜上。每個(gè)點(diǎn)的體積越少越好(1-5μl)，以保證點(diǎn)盡可能地小。如果需要使用5μl以上的樣品，在點(diǎn)完一次后,干燥2-5分鐘,再點(diǎn)一次。讓膜干燥10-15分鐘，或直至無(wú)可見(jiàn)水分。 4.用封閉液封閉膜上的非特異性位點(diǎn)，室溫震蕩孵育1h。 5.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋一抗，并加到膜上，室溫震蕩孵育1h。 6.用洗滌液洗膜4次，每次5分鐘，用盡可能大體積的洗脫液。 7.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋二抗，并加到膜上，室溫震蕩孵育1h。 8.用洗滌液洗膜4次，每次5分鐘，用盡可能大體積的洗脫液。 9.準(zhǔn)備底物工作液。白介素1ELISA試劑盒廠家制備足夠體積的工作液,以確保印跡點(diǎn)完全濕潤(rùn),且印跡點(diǎn)在孵育過(guò)程中不會(huì)干。 10.將膜放在底物工作液中孵育5分鐘。 11.將膜取出,放在塑料布或其它防護(hù)膜上。 12.蛋白一側(cè)朝上,將印跡貼到膠片上,曝光30-60秒。為獲得*結(jié)果,曝光時(shí)間可能不同。如果*次曝光不夠,再試試2-5分鐘。 13.在一張優(yōu)化好的印跡膜上,底物產(chǎn)生的信號(hào)可能會(huì)持續(xù)6-24小時(shí),這取決于具體的產(chǎn)品。

編輯：小檀20190203