內(nèi)在小鼠 ERFETM的ELISA 是一種檢測(cè)試劑盒，設(shè)計(jì)用于定量血清中的小鼠赤鐵酮。該試劑盒不含巰基乙醇、疊氮化物或汞基防腐劑。
小鼠赤蘚鐵酮的檢測(cè)基于雙抗體夾心ELISA方法。96孔微孔板測(cè)定板預(yù)涂有抗小鼠紅鐵酮多克隆抗體。將小鼠血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ找号c緩沖液混合并在測(cè)定板中孵育。樣品中存在的小鼠紅蘚鐵酮與測(cè)定板上的固定化抗體結(jié)合。然后洗滌板以去除未結(jié)合的小鼠紅鐵酮。加入與生物素偶聯(lián)的第//二種抗小鼠紅鐵酮抗體，然后加入HRP-SA偶聯(lián)物，HRP-SA偶聯(lián)物與生物素化的抗小鼠赤紅鐵酮結(jié)合。光密度 （OD） 是通過(guò)添加 TMB 來(lái)測(cè)量的，反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色，并且隨著終止溶液的加入而停止顯影。在酶標(biāo)儀上以 450nm 處讀取 OD，并通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的對(duì)數(shù)濃度與其相應(yīng)的 OD 來(lái)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。顏色的強(qiáng)度與樣品中 ERFE 的濃度成正比?？倷z測(cè)運(yùn)行時(shí)間不到 3 小時(shí)。
注意：
根據(jù)我們的研究，健康小鼠（C57BL / 6）的血清ERFE濃度基本上無(wú)法檢測(cè)到（低于檢測(cè)限）。在紅細(xì)胞生成無(wú)效（β-地中海貧血）的小鼠模型中，血清ERFE濃度范圍為1-2 ng / ml。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：
每次運(yùn)行采用包含零點(diǎn)的八點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。下圖所示為典型標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)示例（注意：實(shí)際計(jì)算請(qǐng)勿直接使用該示例曲線(xiàn)）。
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