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ATCC
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ATCC CCL-240(HL-60細(xì)胞),HL-60,人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞
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RC Gallo
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人
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外周血；早幼粒細(xì)胞
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急性粒－單核細(xì)胞白血病
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原粒細(xì)胞
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IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)12200036)，80%；FBS，20%。
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CCL-240
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氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
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1：2至1：6，每周2次。
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90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
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陰性
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1
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該細(xì)胞可以作為轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。
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D5S818: 12
D13S317: 8,11
D7S820: 11,12
D16S539: 11
vWA: 16
THO1: 7,8
Amelogenin: X
TPOX: 8,11
CSF1PO: 13,14
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AK-1, 1
ES-D, 1
G6PD, B
GLO-I, 1
Me-2, 1
PGM1, 1
PGM3, 1
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Nucleotide (GenBank) : M62505 Human C5a anaphylatoxin receptor mRNA, complete cds.
Nucleotide (GenBank) : NM_001736 Homo sapiens complement component 5 receptor 1 (C5a ligand) (C5R1), mRNA.
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Gallagher R, et al. Characterization of the continuous, differentiating myeloid cell line (HL-60) from a patient with acute promyelocytic leukemia. Blood 54: 713-733, 1979. PubMed: 288488
Collins SJ, et al. Terminal differentiation of human promyelocytic leukemia cells induced by dimethyl sulfoxide and other polar compounds. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 2458-2462, 1978. PubMed: 276884
Collins SJ, et al. Continuous growth and differentiation of human myeloid leukaemic cells in suspension culture. Nature 270: 347-349, 1977. PubMed: 271272
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Nahm MH, et al. Identification of cross-reactive antibodies with low opsonophogocytic activity for Streptoccus pneumoniae. J. Infect. Dis. 176: 698-703, 1997. PubMed: 9291318
Berninghausen O, Leippe M. Necrosis versus apoptosis as the mechanism of target cell death induced by Entamoeba histolytica. Infect. Immun. 65: 3615-3621, 1997. PubMed: 9284127
Aparicio CL, et al. Correction for label leakage in fluorimetric assays of cell adhesion. BioTechniques 23: 1056-1060, 1997. PubMed: 9421636
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ATCC CCL-240(HL-60細(xì)胞)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞特點(diǎn)和簡(jiǎn)介
HL-60是一株早幼粒細(xì)胞。 外周血白細(xì)胞來自一位患有急性粒-單核細(xì)胞白血病的36歲白人女性。 HL-60 自發(fā)分化，丁酸鹽、次黃嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1% to 1.5%)、放線菌素D和視黃酸可以促進(jìn)分化。 細(xì)胞表現(xiàn)出吞噬活性，并對(duì)趨化刺激有響應(yīng)。致癌基因myc表達(dá)陽性。 在本庫(kù)通過支原體檢測(cè)。 在本庫(kù)通過STR檢測(cè)。
ATCC CCL-240(HL-60細(xì)胞)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基。
5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián) 系。
ATCC CCL-240(HL-60細(xì)胞)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然 后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng) 過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶 中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落 ，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中 或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞， 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍 存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí) 以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
ATCC CCL-240(HL-60細(xì)胞)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述 現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、 所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶 自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì) 胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼 壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮 培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)?您再免費(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培 養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時(shí)正常傳代。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì) 胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系 ，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。
