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ATCC
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ATCC CRL-2594(MC3T3-E1細(xì)胞), MC3T3-E1, 小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14
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RT Franceschi
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小鼠
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顱頂骨
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成纖維細(xì)胞樣
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貼壁生長
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MEMα+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024)，90%；FBS，10%。
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CRL-2594
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氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
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1：2至1：6，每周2次。
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90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
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陰性
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1
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該細(xì)胞是研究體外成骨細(xì)胞分化，特別是細(xì)胞外基質(zhì)信號的良好模型。他們的行為類似于原發(fā)性顱骨成骨細(xì)胞。
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Wang D, et al. Isolation and characterization of MC3T3-E1 preosteoblast subclones with distinct in vitro and in vivo differentiation/mineralization potential. J. Bone Miner. Res. 14: 893-903, 1999. PubMed: 10352097
forms bone-like ossicles
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ATCC CRL-2594(MC3T3-E1細(xì)胞)小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14特點和簡介
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。 MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595)和MC3T3亞克隆30(ATCC CRL-2596)在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨鈣素(OCN)，和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。 植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細(xì)胞只是產(chǎn)生纖維組織。 這些細(xì)胞系是研究體外成骨細(xì)胞分化的好模型，尤其是ECM信號。 它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細(xì)胞的行為類似。 在本庫通過支原體檢測。
ATCC CRL-2594(MC3T3-E1細(xì)胞)小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基。
5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián) 系。
ATCC CRL-2594(MC3T3-E1細(xì)胞)小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然 后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng) 過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶 中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落 ，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中 或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞， 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍 存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時 以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
ATCC CRL-2594(MC3T3-E1細(xì)胞)小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述 現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、 所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶 自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì) 胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼 壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮 培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)?您再免費寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培 養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì) 胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系 ，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。
