|
ATCC
|
|
ATCC HTB-67(SK-MEL-1), SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細(xì)胞
|
|
G Trempe, LJ Old
|
|
人
|
|
皮膚
|
|
皮膚黑色素瘤
|
|
球形細(xì)胞樣
|
|
懸浮生長
|
|
MEM培養(yǎng)基(MEM，GIBCO，貨號41500034)，90%；FBS，10%。
|
|
HTB-67
|
|
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
|
|
1：2至1：6，每周2次。
|
|
90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
|
|
陰性
|
|
1
|
Amelogenin: X,Y
CSF1PO: 12,13
D13S317: 11
D16S539: 11,12
D5S818: 12,13
D7S820: 12
THO1: 6
TPOX: 11
vWA: 16,17
|
AK-1, 1
ES-D, 1
G6PD, B
GLO-I, 1-2
PGM1, 1
PGM3, 1
|
Oettgen HF, et al. Suspension culture of a pigment-producing cell line derived from a human malignant melanoma. J. Natl. Cancer Inst. 41: 827-843, 1968. PubMed: 4879578
Fogh J, et al. Absence of HeLa cell contamination in 169 cell lines derived from human tumors. J. Natl. Cancer Inst. 58: 209-214, 1977. PubMed: 833871
Goodfellow M, et al. One hundred and twenty-seven cultured human tumor cell lines producing tumors in nude mice. J. Natl. Cancer Inst. 59: 221-226, 1977. PubMed: 77210034
Giraldo G, et al. Human sarcomas in culture. Foci of altered cells and a common antigen; induction of foci and antigen in human fibroblast cultures by filtrates. J. Exp. Med. 133: 454-478, 1971. PubMed: 4329447
|
ATCC HTB-67(SK-MEL-1)人皮膚黑色素瘤細(xì)胞特點和簡介
該細(xì)胞由Oettgen F及其同事從一名29歲的患有廣泛、快速進(jìn)展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導(dǎo)管中分離建立的。該細(xì)胞可產(chǎn)生黑色素，電鏡檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關(guān)。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對該細(xì)胞系的抗體。
ATCC HTB-67(SK-MEL-1)人皮膚黑色素瘤細(xì)胞接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
ATCC HTB-67(SK-MEL-1)人皮膚黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
ATCC HTB-67(SK-MEL-1)人皮膚黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。
