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EpiQuik? m6A RNA 甲基化定量試劑盒（比色法）是一整套優(yōu)化的緩沖液和試劑，用于對 RNA 中的 N6-甲基腺苷（m6A 或 6mA）進行比色定量。它適用于使用從任何物種（如哺乳動物、植物、真菌、細菌和病毒）分離的總 RNA 直接檢測 m6A RNA 甲基化狀態(tài)。該套件具有以下優(yōu)點和特點：

• 使用 m6A 抗體進行類似比色 ELISA 的檢測，步驟簡單易懂，方便快捷。整個過程可以在 3 小時 45 分鐘內(nèi)完成。
• 高靈敏度，其中檢測限可低至 10 pg 的 m6A。
• 獨特的結(jié)合溶液使 RNA >70 nts 能夠緊密結(jié)合到孔中，從而能夠定量 mRNA 和 ncRNA（如 tRNA、rRNA 和 snRNA）中的 m6A。
• 優(yōu)化的抗體和增強子溶液對 m6A 具有高度特異性，在樣品 RNA 的指定濃度范圍內(nèi)與未甲基化的腺苷沒有交叉反應(yīng)性。
• 包括通用陽性和陰性對照，適用于定量任何物種的 m6A。
• 聯(lián)排孔板規(guī)格使分析更加靈活，可用于手動或高通量分析。
• 簡單、可靠且一致的分析條件。

N6-甲基腺苷 （m6A） 是真核生物中存在的 RNA 分子中*常見和*豐富的修飾。m6A 修飾由甲基轉(zhuǎn)移酶復合物 METTL3 催化，并被*近發(fā)現(xiàn)的 m6A RNA 去甲基化酶 FTO 和 ALKBH5 去除，它們以 α-酮戊二酸 （α-KG） 和 Fe2+ 依賴性方式催化 m6A 去甲基化。結(jié)果表明，METTL3、FTO 和 ALKBH5 在許多生物過程中發(fā)揮著重要作用，從發(fā)育和代謝到生育能力。m6A 占所有 RNA 堿基甲基化的 80% 以上，存在于各種物種中。m6A 主要分布在 mRNA 中，也存在于 tRNA、rRNA 和 snRNA 等非編碼 RNA 中。mRNA 轉(zhuǎn)錄本中 m6A 的相對豐度已被證明會影響 RNA 代謝過程，例如剪接、核輸出、翻譯能力和穩(wěn)定性以及 RNA 轉(zhuǎn)錄。m6A RNA 甲基化酶和去甲基化酶缺陷誘導的 m6A 甲基化水平異?？蓪е?RNA 功能障礙和疾病。例如，由于 FTO 突變患者 FTO 活性增加，靶 mRNA 中 m6A 水平異常低，通過尚不確定的途徑，導致肥胖和相關(guān)疾病的發(fā)病。RNA 中動態(tài)且可逆的化學 m6A 修飾也可能作為具有深遠生物學意義的新型表觀遺傳標記。因此，更好地了解 m6A RNA 甲基化水平和 RNA 轉(zhuǎn)錄本上的分布的更多有用信息可能有利于疾病的診斷和治療。

原則和程序
在該檢測中，使用 RNA 高結(jié)合溶液將總 RNA 結(jié)合到剝離孔中。使用特異性捕獲 N6-甲基腺苷抗體和檢測抗體檢測 N6-甲基腺苷 （m6A）。檢測到的信號被增強，然后通過在微孔板分光光度計中讀取 450 nm 波長的吸光度進行比色定量。m6A 的量與測量的 OD 強度成正比。該試劑盒中提供陰性和陽性 RNA 對照?？梢赃M行標準曲線（范圍：0.02 至 1 ng m6A），也可以使用單一量的 m6A 作為陽性對照。由于 m6A 含量可能因組織而異，也不同于正常和疾病狀態(tài)，或者在處理和未處理條件下會有所不同，因此建議運行重復樣品，以確保生成的信號得到驗證。該試劑盒將允許用戶定量 m6A 的**量并確定兩種不同 RNA 樣品的相對 m6A RNA 甲基化狀態(tài)。