26250-084 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
基因組DNA提取
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服務(wù)項(xiàng)目
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材料要求
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服務(wù)價(jià)格
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獲得DNA量
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周期
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細(xì)菌基因組DNA提取
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對數(shù)生長期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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1-2ug
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1-2周
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細(xì)胞基因組DNA提取
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1×106新鮮或凍存的細(xì)胞
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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血液基因組DNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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組織基因組DNA提取
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100mg新鮮或-20度凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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服務(wù)項(xiàng)目
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材料要求
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服務(wù)價(jià)格
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獲得RNA量
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周期
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細(xì)菌總RNA提取
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對數(shù)生長期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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細(xì)胞總RNA提取
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1×106懸浮培養(yǎng)或新鮮收集的細(xì)胞
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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血液總RNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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動(dòng)物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈100ug
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1-2周
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植物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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26250-084 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
酵母雙（單）雜交cDNA文庫構(gòu)建
1. 服務(wù)流程
1.1 客戶樣品QC
1.2 Total RNA的提取。
1.3 mRNA的分離。
1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。
1.5 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。
1.6 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。
1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。
1.8 cDNA文庫的QC。
a) 檢測文庫庫容量。
b)隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子，PCR檢測平均插入片段大小，陽性率。
1.9 初級文庫鋪板，抽提質(zhì)粒
1.10 初級文庫質(zhì)粒與PDEST22（或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定
載體，根據(jù)客戶需求確定載體）載體進(jìn)行重組反應(yīng)，電轉(zhuǎn)化，檢測文庫質(zhì)量。
a) 檢測文庫庫容量。
b)每個(gè)文庫隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子，PCR檢測平均插入片段大小，陽性率。
2.送樣要求
2.1 針對每個(gè)文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug總RNA。
3.發(fā)貨內(nèi)容
3.1 我們提供構(gòu)建好的酵母文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），擴(kuò)增后初級文庫甘油菌，初級
文庫中抽質(zhì)粒，隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報(bào)告，酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。
4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
4.1 文庫庫容量：大于1*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
4.3 陽性率：大于95%。
5.服務(wù)時(shí)間
30個(gè)工作日內(nèi)
收費(fèi)：人民幣30000.00
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基因甲基化檢測
甲基化是在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA Methyltransferase, DNMT）催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine, SAM）提供甲基，在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶環(huán)的五號碳原子上加上甲基的共價(jià)修飾過程。DNA甲基化修飾現(xiàn)象廣泛存在于多種有機(jī)體中，是*早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一，是表觀遺傳學(xué)（Epigenetics）的重要組成部分。大量研究表明，DNA甲基化不改變DNA的**結(jié)構(gòu)，但是能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而在基因的表達(dá)及其調(diào)控、DNA的復(fù)制、細(xì)胞的生長發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病 （如發(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調(diào)等）發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。 DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N6-甲基腺嘌呤及7-甲基鳥嘌呤。在高等生物中，5-甲基胞嘧啶多發(fā)于CpG二核苷酸序列中，基因組中60%-90%的CpG是甲基化的。在甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）的催化作用下，利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供的甲基，使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧啶極易在進(jìn)化中丟失，高等真核生物中CpG序列遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其理論值，但在基因組的某些區(qū)域中，通常是基因的啟動(dòng)子和**外顯子區(qū)，CpG序列密度很高，可以達(dá)均值的5倍以上，成為鳥嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū)，形成所謂的CpG島。哺乳類基因組中約存在4萬個(gè)CpG島，大多位于轉(zhuǎn)錄單元的5’區(qū)。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現(xiàn)象，而啟動(dòng)子CpG 島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機(jī)制。因此，基因啟動(dòng)子甲基化檢測在**診斷、藥物敏感性檢測等方面具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
服務(wù)項(xiàng)目：
1．甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設(shè)計(jì)針對甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過電泳檢測MSP擴(kuò)增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段，則說明該位點(diǎn)存在甲基化；反之，說明被檢測的位點(diǎn)不存在甲基化。
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特點(diǎn)：適用范圍廣，能夠檢測特異位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。
2．亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR，在擴(kuò)增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，*后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化，稱為BSP-直接測序法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法。
特點(diǎn)：**度高，能夠準(zhǔn)確檢測出甲基化的程度百分比。
送樣要求：
細(xì)胞（≥106 個(gè)）、組織（≥300mg）、血液（≥1ml）、血清（≥1.5ml）等樣品材料，基因組DNA（體積≥20μl，濃度≥50 ng/μl）。
服務(wù)價(jià)格：
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服務(wù)內(nèi)容
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數(shù)量
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單價(jià)
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交貨期限
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數(shù)量
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亞硫酸氫鹽修飾后測序法（BSP）
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≤40個(gè)
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800元/樣本/基因（5個(gè)克?。?/span>
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15～20個(gè)工作日
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＞40個(gè)
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協(xié)商
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1000元/樣本/基因（10個(gè)克隆）
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20～25個(gè)工作日
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＞40個(gè)
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協(xié)商
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甲基化特異性的PCR法（MSP）
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≤50個(gè)
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350元/樣本/基因
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10～20個(gè)工作日
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＞50個(gè)
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