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上海拜力生物科技公司
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商品詳情 參考文獻 相關(guān)資料

關(guān)鍵詞:bEnd.3 bEnd.3細胞 細胞株
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產(chǎn)品詳情:
bEnd.3 bEnd.3細胞 細胞株
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
廠商:上海拜力生物科技
用 途:用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人28S抗核糖體抗體(28S rRNP) 的含量。
標本的采集及保存
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。
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操作步驟
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
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  ATCC細胞代理,

  完全培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%。

  培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%

  bEnd.3 bEnd.3細胞 細胞株傳代方法:

  收到細胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個 瓶消毒后放到*菌 臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開血管平滑肌細胞瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

  (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

  1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中, 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,然后又將 培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶, 細胞隨即脫落下來。

  3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。

  注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細 胞不適應(yīng)而造成生長不好。

  凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS

  儲存:液氮儲存

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  本公司所有細胞入庫之前均經(jīng)過嚴格的細胞質(zhì)量檢測和鑒定 ,所有細胞在出庫之前均經(jīng)過一次嚴格的質(zhì) 檢認證,確保細胞到 每一位用戶手里都是*好狀態(tài)。

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