關(guān)鍵詞：BT474 BT474細(xì)胞 細(xì)胞株
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產(chǎn)品詳情：
BT474 BT474細(xì)胞 細(xì)胞株
規(guī)格：96T/48T
保存條件：2-8℃
廠商：上海拜力生物科技
用 途：用于定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人28S抗核糖體抗體（28S rRNP） 的含量。
標(biāo)本的采集及保存
1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
BT474 BT474細(xì)胞 細(xì)胞株
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
說(shuō)明
1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。
2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說(shuō)明書可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
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ATCC細(xì)胞代理，
完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%
BT474 BT474細(xì)胞 細(xì)胞株傳代方法：
收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 (一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè) 瓶消毒后放到*菌 臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開血管平滑肌細(xì)胞瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS(不含鈣，鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中， 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將 培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶， 細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。
注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì) 胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。
凍存方法：凍存液：基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS
儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存
上海拜力生物提供ATCC 細(xì)胞|細(xì)胞系|細(xì)胞株|腫瘤細(xì)胞|細(xì)胞|貼壁 細(xì)胞|懸浮細(xì)胞|,細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范,提供的細(xì)胞 株背景清楚,提供 參考文獻(xiàn)和*優(yōu)培養(yǎng)條件。
本公司所有細(xì)胞入庫(kù)之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)和鑒定 ，所有細(xì)胞在出庫(kù)之前均經(jīng)過(guò)一次嚴(yán)格的質(zhì) 檢認(rèn)證，確保細(xì)胞到 每一位用戶手里都是*好狀態(tài)。
