MM45T.Li細胞 細胞的常規(guī)觀察
細胞接種或傳代以后，實驗者每天或至多間隔1～2d，要對細胞做常規(guī)性檢查。觀察細胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細胞動態(tài)變化，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時采取措施。一. 細胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
將液氮或- 80℃ 保存的腫瘤細胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細胞懸液，于 1500 轉(zhuǎn)/ 分，離心 3 分鐘。 棄上清，再吸取 8.0ml 培養(yǎng)基質(zhì)混勻細胞沉淀，再 1500 轉(zhuǎn)/ 分，離心 3 分鐘，棄上清，細胞沉淀用 1.0ml 培養(yǎng)基混勻，備用。 另取一個 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含 腫瘤細胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于 37℃，5%CO2 孵育箱中培養(yǎng)。 若此腫瘤細胞懸浮生長，大約 3-4 天細胞基質(zhì)會變黃，5.0ml 細胞懸液可傳代一個方瓶培養(yǎng)，可用 3-4 個方瓶培養(yǎng)，一個方瓶中呈對數(shù)生長的腫瘤細胞可達 1-1.5×107 個，根據(jù)試驗所需，可決定傳代的次數(shù)。 若此腫瘤細胞呈貼壁生 長，經(jīng)過 3-4 天，腫瘤細胞生長至 80%-95% 單層時，棄上清，用 0.5mM 的EDTA(難消化的腫瘤細胞用0.25%胰酶1.0ml)，處理腫瘤細胞大約 3-5 分鐘，用倒置顯微鏡觀察，當(dāng) 90% 的腫瘤細胞變圓時，即可用彎管吹打并將消化的細胞轉(zhuǎn)移到 15ml 離心管中，于 1500 轉(zhuǎn)/ 分下，離心 3 分鐘，棄上清，加少許培養(yǎng)基混勻，可傳代 3 個 75cm2 方瓶擴大培養(yǎng)。
MM45T.Li細胞 細胞形態(tài)
生長狀態(tài)良好的細胞http://handsem.com/goodsid/fenleier/2909278/1.html，在一般顯微鏡下觀察時可見，細胞透明度大、折光性強、輪廓不清。細胞生長**時，輪廓增強，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細胞之間空隙加大，細胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點，如上皮細胞變成類上皮細胞等VX2細胞某些染料當(dāng)細胞死亡時能透過變性的胞膜與解體的細胞核DNA結(jié)合，而令其著色。因而常用臺盼藍(trypan blue) 鑒別細胞死活，活細胞不著色，死細胞核呈藍色。二. 細胞凍存
將對數(shù)生長的腫瘤細胞用 1 個 75cm2 方瓶按上述方法收集，于 1500 轉(zhuǎn)/分離心 3 分鐘，棄上清，用保種液( 含 10% DMSO 的小牛血清)3.0ml 混勻，分別加入到 2-3 只保種管中，寫上腫瘤細胞名稱、時間、保種者姓名，放- 80℃ 保存，次日將它們轉(zhuǎn)移到液氮中保存( 注： -80℃ 下可保存細胞半年至一年，液氮可保存細 胞 5-10 年，甚至更長的時間)。以上所有物品均需經(jīng)過高溫滅菌 ( 121℃，30 分鐘) ，培養(yǎng)基質(zhì)則經(jīng)過過濾(0.22uM)除菌，所有操作均必須遵守?zé)o菌操作技術(shù)，避免細菌、真菌、病原體、衣原體等污染。
MM45T.Li細胞 注意事項：
1、嚴(yán)格無菌操作.操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作;無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。MM45T.Li細胞，拜力生物常年供應(yīng)，量大從優(yōu)。訂購**：021-33779008。實驗操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作
2、*初接種的培養(yǎng)瓶應(yīng)盡量小些，而接種的細胞數(shù)應(yīng)盡量多些。
3、細胞在體外進行培養(yǎng),失去了機體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長.
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