逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞

逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞詳細介紹

逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞培養(yǎng)條件：
完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞傳代方法：
收到細胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 （一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到*菌 臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中， 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代；2~3天1次。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細 胞不適應而造成生長不好。
凍存方法：凍存液：基礎培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS　
儲存：液氮儲存

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