關(guān)鍵詞:(原核)可溶蛋白表達(dá)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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(原核)可溶蛋白表達(dá)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：(原核)可溶蛋白表達(dá)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://handsem.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
實(shí)驗(yàn)描述  
pCold-SUMO原核蛋白表達(dá)試劑盒所包含的原核表達(dá)載體(pCold-SUMO)是在pCold載體基礎(chǔ)上改造而成(HaiGene**)，該載體啟動(dòng)子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細(xì)菌，在低溫下(15度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而*大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率，提高了蛋白可溶性表達(dá)，增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量，而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。同時(shí)，pCold-SUMO原核蛋白表達(dá)試劑盒配備的SUMO Protease(含 6×His 標(biāo)簽)可特異性去除SUMO tag，從而得到不含任何標(biāo)簽的重組蛋白。TEE 信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。BL21(DE3)Chaprone E.coli 細(xì)菌中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。 分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表達(dá)受控于四環(huán)素（tetR）操縱子。
組分名稱 數(shù)量 保存
pCold-SUMO Vector (100 ng/μl) 50 μl -20℃
SUMO Protease (10 U/μl) 100 μl -70℃
10XSUMO Buffer 1 ml -20℃
3M NaCl 0.5 ml -20℃
BL21(DE3)Chaprone E.coli 100 μl -70℃
pCold-SUMO Primer-F 100 μl -20℃
pCold-SUMO Primer-R 100 μl -20℃
主要特征
冷啟動(dòng)子，低溫誘導(dǎo)表達(dá)，*大限度地提高蛋白地可溶性
分子伴侶可協(xié)助蛋白的正確折疊
可大大的提高蛋白表達(dá)量
獨(dú)特的SUMO蛋白酶可切割SUMO標(biāo)簽而得到不含任何多余氨基酸的蛋白
應(yīng)用
包涵體蛋白的*佳解決方法，提高蛋白的可溶性優(yōu)化表達(dá)。
Fig . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未誘導(dǎo) 
2. pET15b系統(tǒng)表達(dá)全菌體蛋白
3.pET15b系統(tǒng)表達(dá)上清液(可溶蛋白部分)
4.pCold-SUMO表達(dá)于BL21(DE3)全菌體蛋白
5.pCold-SUMO表達(dá)于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
6.pCold-SUMO表達(dá)于BL21(DE3)chaprone全菌體蛋白
7.pCold-SUMO表達(dá)于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
8.使用Ni-NTA Resin純化SUMO融合蛋白
9.使用SUMO酶切除SUMO tag后的目的蛋白
泳道2和3表明使用pET系統(tǒng)表達(dá)幾乎無可溶性蛋白表達(dá)，皆為包涵體；泳道4和5表明使用pCold-SUMO系統(tǒng)于BL21(DE3)菌中，可溶性蛋白表達(dá)約占40%；泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可進(jìn)一步提高蛋白的可溶性表達(dá)。