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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
（一）間接法測(cè)抗體
1．酶標(biāo)抗抗體工作濃度的選擇
（1）用100ng/ml人IgG進(jìn)行包被，洗滌。
（2）將酶標(biāo)抗人IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中，保溫、洗滌。
（3）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后，讀取吸亮度（A），繪制曲線如圖15-10。讀取A值在1.0時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度。該酶標(biāo)抗人IgG的工作濃度應(yīng)為1/1600。
2．棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度
（1）用包被液將抗原作一系列稀釋后進(jìn)行包被，洗滌。
（2）將強(qiáng)陽(yáng)性參考血清、弱陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作1:100稀釋，加樣，保溫，洗滌。
（3）加按工作濃度稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫，洗滌。
（4）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后讀取A值。
夾心ELISA包被抗體和酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇
（1）抗體免疫球蛋白用包被緩沖液稀釋至蛋白濃度為10、1和0.1μg/ml，分別在ELISA板上進(jìn)行包被，每一濃度包括三個(gè)縱行，洗滌。
（2）在一個(gè)橫行各包被孔中加入強(qiáng)陽(yáng)性抗原液，另一橫行加入弱陽(yáng)性抗原液，第三橫行加入陰性對(duì)照液，保溫，洗滌。
（3）將酶標(biāo)抗體用稀釋液稀釋成三個(gè)濃度，例如1:1000、1:5000和1:25000。分別加入每一包被濃度的一個(gè)縱行中，保溫，洗滌。
（4）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后，讀取A值。
（5）以強(qiáng)陽(yáng)性抗原的A值在0.8左右、陰性參考的A值小于0.1的條件作*適條件，據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度。從表15-2可看出包被抗體濃度可選用1μg/ml，酶標(biāo)抗體的稀釋度可選為1:5000。為了進(jìn)一步節(jié)省試劑，可以此濃度為基點(diǎn)，縮小間距再做進(jìn)一步的棋盤滴定。
（5）選擇強(qiáng)陽(yáng)性參考血清的A值為0.8左右、陰性參考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀釋度作為工作濃度。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定）的基本原理有三條：
1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
2. 抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
3. 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
注意事項(xiàng) :
正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待測(cè)樣品應(yīng)做一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清，兔血清、BSA或OVA等封閉。
【生物分子】 抗生素/抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥物結(jié)合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇激素結(jié)合物 半抗原反應(yīng) 半抗原載體結(jié)合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質(zhì)/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 細(xì)菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細(xì)胞質(zhì)蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細(xì)胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細(xì)胞裂解 組織提取 重組細(xì)胞因子 
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學(xué)緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學(xué)試劑 其它生化試劑
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR試劑 PCR對(duì)照 特異性PCR試劑盒 PCR克隆試劑盒 RNA 載體及構(gòu)建 PCR克隆載體 M13克隆載體 細(xì)菌克隆載體 文庫(kù)及構(gòu)建 cDNA文庫(kù) 基因組文庫(kù) 噬菌體展示文庫(kù)
【酶】限制性內(nèi)切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 連接酶
【cDNA及合成純化】cDNA全長(zhǎng)基因 RNA cDNA合成 cDNA相關(guān)試劑
【核酸/蛋白合成】Oligo純化 核酸合成柱 核酸合成試劑
【克隆與表達(dá)】克隆基因 克隆試劑盒 克隆篩選
【表達(dá)分析】 Northern印跡分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝膠制備 蛋白電泳試劑 預(yù)制蛋白凝膠
【核酸純化】 DNA凝膠純化 DNA提取純化 PCR產(chǎn)物純化
【RNAi技術(shù)】 siRNA 反義寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文庫(kù)
【蛋白檢測(cè)】 Western印跡 報(bào)告基因檢測(cè) 蛋白檢測(cè)試劑盒
【實(shí)驗(yàn)動(dòng)物】 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 小鼠 大鼠 模式動(dòng)物
【臨床檢測(cè)試劑】 生化檢測(cè) 遺傳學(xué)檢測(cè) 血液檢測(cè)
【相關(guān)檢驗(yàn)試劑】 食品**檢測(cè) 藥品**檢測(cè)
【蛋白純化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白穩(wěn)定
【細(xì)胞培養(yǎng)】 血清 血清替代物 細(xì)胞培養(yǎng)基 細(xì)胞 細(xì)胞株 感受態(tài)細(xì)胞 新鮮細(xì)胞分離
【干細(xì)胞】 干細(xì)胞/祖細(xì)胞 原代細(xì)胞 干細(xì)胞培養(yǎng)基
【蛋白修飾】 蛋白標(biāo)記 載體蛋白結(jié)合 其它
【細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)】 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞分離 細(xì)胞增殖
【藥物篩選】 熒光素細(xì)胞活力/增殖/毒性檢測(cè)
【免疫檢測(cè)】 放射性免疫檢測(cè) 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)
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