關鍵詞:凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務
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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
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測序實驗流程：
利用凝膠進行的電泳遷移率變動分析。不同大小的分子在凝膠中電泳移動的速度不同，當某種分子與另一種分子特異性結合后，它在非變性凝膠電泳帶中的位置就發(fā)生了變化，由此可以分析不同分子間的相互作用。如待檢測DNA樣品與核蛋白提取物孵育后進行電泳，如果核蛋白提取物中存在能與DNA特異結合的蛋白質，由于大分子復合體的形成，電泳時就出現遷移率降低，區(qū)帶滯后的現象。
1. 制膠 必須是非變性PAGE凝膠,我們實驗室一般用6.5%的非變性膠.制膠很重要,直接影響電泳的效果!一般控制在5分鐘凝固的效果.
10X TBE 1.0ml
40% Acrylamide（40%聚丙烯酰胺） 3.3ml
50% Glycerol（50%甘油） 1.0ml
dH2O（蒸餾水） 14.8ml
TEMED（四甲基乙二氨） 20μl
脫氣10min
10% AP（過硫酸氨） 120μl
總量 20.0ml
2. 一般試劑盒包括的試劑
l 10X Binding Buffer（10X 結合反應液）(-20 oC)
l Poly (dI:dC) (dI:dC)（聚核苷酸競爭物）(-20 oC)
l 6X Loading Buffer（10X 上樣緩沖液）(4 oC)
l Cold oligonucleotides（非標記競爭性寡核苷酸）(-20 oC)
l Biotin-Labeled Probe（生物素標記探針）(-20 oC)
l Streptavidin-HRP（鏈霉親核素-HRP）(4oC)
l 2×Blocking Buffer（2× 封閉液）(4 oC)
l 5×Washing Buffer（5× 洗滌液）(4 oC)
l Equilibration Solution（平衡液）(4 oC)
l Binding-membrane（結合反應膜）(RT)
3. 結合反應
每次結合反應需1-5μl核蛋白(根據核蛋白濃度而定)，根據不同的核提取物濃度加入核提取物用量，用雙蒸蒸餾水將終體積調節(jié)到15μl
（1） 結合反應體系：
10X 結合反應液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細胞核提取物* ? μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
（2）特異性反應確認競爭反應體系：
10X 結合反應液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細胞核提取物 ? μl
未標記的競爭性寡核 2.0μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
其中:
探針用量: 這相當于10-50fmoles的DNA探針。我們通常是*少50fmol.
蛋白樣品用量: 一般用量在2---20ug(控制在1-5μl)蛋白, 總體系15ul. 細胞核抽屜物濃度都比較低,組織的一般都比較高,因為雜蛋白較多.