關(guān)鍵詞:凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://handsem.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
1. 制膠 必須是非變性PAGE凝膠,我們實(shí)驗(yàn)室一般用6.5%的非變性膠.制膠很重要,直接影響電泳的效果!一般控制在5分鐘凝固的效果.
10X TBE 1.0ml
40% Acrylamide（40%聚丙烯酰胺） 3.3ml
50% Glycerol（50%甘油） 1.0ml
dH2O（蒸餾水） 14.8ml
TEMED（四甲基乙二氨） 20μl
脫氣10min
10% AP（過(guò)硫酸氨） 120μl
總量 20.0ml
2. 一般試劑盒包括的試劑
l 10X Binding Buffer（10X 結(jié)合反應(yīng)液）(-20 oC)
l Poly (dI:dC) (dI:dC)（聚核苷酸競(jìng)爭(zhēng)物）(-20 oC)
l 6X Loading Buffer（10X 上樣緩沖液）(4 oC)
l Cold oligonucleotides（非標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)性寡核苷酸）(-20 oC)
l Biotin-Labeled Probe（生物素標(biāo)記探針）(-20 oC)
l Streptavidin-HRP（鏈霉親核素-HRP）(4oC)
l 2×Blocking Buffer（2× 封閉液）(4 oC)
l 5×Washing Buffer（5× 洗滌液）(4 oC)
l Equilibration Solution（平衡液）(4 oC)
l Binding-membrane（結(jié)合反應(yīng)膜）(RT)
3. 結(jié)合反應(yīng)
每次結(jié)合反應(yīng)需1-5μl核蛋白(根據(jù)核蛋白濃度而定)，根據(jù)不同的核提取物濃度加入核提取物用量，用雙蒸蒸餾水將終體積調(diào)節(jié)到15μl
（1） 結(jié)合反應(yīng)體系：
10X 結(jié)合反應(yīng)液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細(xì)胞核提取物* ? μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標(biāo)記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
（2）特異性反應(yīng)確認(rèn)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)體系：
10X 結(jié)合反應(yīng)液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細(xì)胞核提取物 ? μl
未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)性寡核 2.0μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標(biāo)記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
其中:
探針用量: 這相當(dāng)于10-50fmoles的DNA探針。我們通常是*少50fmol.
蛋白樣品用量: 一般用量在2---20ug(控制在1-5μl)蛋白, 總體系15ul. 細(xì)胞核抽屜物濃度都比較低,組織的一般都比較高,因?yàn)殡s蛋白較多.