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基因組DNA提取技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用Pipet Tip的**將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。
保存方式
室溫。低溫保存可能會(huì)有沉淀析出。如果發(fā)生析出現(xiàn)象，請(qǐng)于50℃溶解后，再于室溫保存。
操作方法
全套操作約需1小時(shí)，分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟，詳細(xì)說(shuō)明如下。
一. 勻漿和細(xì)胞裂解。
使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟，具體說(shuō)明如下：
【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】
使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí)：
① 取1～100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中，快速用力展研成勻漿。
注）下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。
A．富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
B．富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
C．富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織（如骨骼）等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，溫和研磨30秒鐘。
注）使用上述①-注）的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，請(qǐng)?jiān)诩尤隨olution A及RNase A1后，將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl，請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl，65℃保溫5分鐘。
二.使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí)：
① 取1～100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊狀。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中，充分振蕩混合后，65℃保溫5分鐘。
三.使用懸浮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞時(shí)：
① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的細(xì)胞懸浮液，5,000 rpm離心5分鐘，棄上清（細(xì)胞培養(yǎng)液）。
② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細(xì)胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘，然后室溫靜置1分鐘。
四.使用貼壁細(xì)胞時(shí)：
① 棄盡培養(yǎng)液，向培養(yǎng)皿中加入650 μl的Solution A，室溫靜置1分鐘。
注）96孔板等的每個(gè)孔中一次容納不了650 μl 溶液時(shí)，請(qǐng)分?jǐn)?shù)次處理細(xì)胞。
② 用移液槍的槍頭吹落貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，取650 μl的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至Collection Tube中。
③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘，然后室溫靜置1分鐘。