關(guān)鍵詞:多克隆抗體制備|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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多克隆抗體制備|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
多克隆抗體的制備步驟
  1) 家兔仰臥于兔架上固定頭部，用紗布固定四肢。頭部略放低以暴露頸部。剃毛并消毒皮膚。
   2) 沿頸部中線用手術(shù)刀切開皮膚約10cm，分離皮下結(jié)締組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突?。ㄐ⌒牟僮?，如碰到小血管出血，可用止血鉗止血）。
   3) 用直頭止血鉗分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動(dòng)脈后用彎頭眼科鑷使之游離，剝離神經(jīng)和結(jié)締組織。
   4) 于動(dòng)脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線。近心端的動(dòng)脈用血管夾夾住。
   5) 用小拇指墊在血管下，用尖頭眼科手術(shù)剪在兩根絲線間的動(dòng)脈璧上剪一小口（勿剪斷），插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫。
   6) 松開止血鉗，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
3. 血清的分離
如果用三角瓶或平皿盛血，將器皿傾斜放置于37oC烘箱2hr，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀，**天早上用吸管吸取血清。如果用離心管收集，37oC烘箱放置2hr，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀，**天早上離心，10000RCF，10分鐘。在血清中加入NaN3至終濃度0.02%，分裝后-20oC保存
抗血清收獲后，加 1/萬硫柳汞或 1/萬的疊氮鈉防腐，或加入等量的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下的低溫保存，數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無明顯變化。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
1、制備抗原。
2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
3、動(dòng)物免疫。
4、試取血進(jìn)行測(cè)試，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
(一)抗原制備
Ig 是免疫球蛋白，對(duì)異種動(dòng)物而言，是良好的抗原物質(zhì)?？梢源碳ぎ惙N動(dòng)物產(chǎn)生抗 Ig 血清，
經(jīng)適當(dāng)提取后，產(chǎn)生抗 Ig 抗體，又叫**抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標(biāo)記反應(yīng)中，均需制備
抗 Ig 抗體。
(二)材料與試劑
1.提取的動(dòng)物 Ig
2.弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
3.青霉素和鏈霉素
4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
5.其它材料及試劑