關(guān)鍵詞:Western Blotting服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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Western Blotting服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：Western Blotting服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://handsem.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
免疫蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。寶賽生物為您提供全套的常規(guī)免疫印記技術(shù)服務(wù)，同時(shí)本公司采用先進(jìn)的LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)和雙色熒光染料標(biāo)記的二抗*新推出高靈敏度的紅外激光免疫印跡服務(wù)。與常規(guī)化學(xué)發(fā)光方法比較，靈敏度可達(dá)到皮克級(jí)（pg），還具有雙色成像、定量**、成像清晰的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)具備功能強(qiáng)大的軟件系統(tǒng)，可快速判定樣品分子量大小并進(jìn)行定量分析。
1.樣品收集
1）培養(yǎng)的細(xì)胞
貼壁和懸浮細(xì)胞收集方式不同，細(xì)胞裂解液種類各異，推薦含SDS的凝膠加樣緩沖液裂解，煮沸即可。
2）動(dòng)物組織
與細(xì)胞不同，組織塊由于體積較大，須預(yù)先經(jīng)破碎勻漿處理。
2．樣品定量
樣品電泳前需測(cè)定蛋白濃度，以便保證上樣量一致，有利于后續(xù)定量或半定量分析。常用的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法有好多種，其靈敏度和所需時(shí)間不同，且不同的方**受不同干擾物質(zhì)的影響，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)樣品制備方法（裂解液成分、去垢劑和還原劑種類等）自行選擇。
注意事項(xiàng)：
a. 應(yīng)盡量避免引入影響后續(xù)定量的雜蛋白（如細(xì)胞培養(yǎng)液、蛋白酶抑制劑等）及其他干擾物質(zhì)；
b. 樣品濃度應(yīng)適中，1×SDS凝膠加樣緩沖液建議用量：貼壁細(xì)胞按10cm2培養(yǎng)皿/0.1ml，懸浮細(xì)胞按5×106細(xì)胞/0.1ml比例加入；
c. SDS對(duì)蛋白質(zhì)變性和電泳分離至關(guān)重要，濃度應(yīng)控制在2-10%之間，并根據(jù)具體需要調(diào)整；
d. 制備好的樣品可以在-20℃保存，但時(shí)間不宜過長(zhǎng)，并避免反復(fù)凍融，否則蛋白會(huì)發(fā)生降解；
e. 內(nèi)參對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)選擇合適的內(nèi)參。
Western印跡含一系列步驟，包括：
?? 用聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白樣品。
?? 將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到膜上。
?? 鑒定膜上特定蛋白。
主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1. 蛋白質(zhì)抽提
2. 蛋白質(zhì)定量
3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜；
5. 膜的封閉和一抗抗體孵育；
6. Rockland熒光標(biāo)記二抗孵育
7. LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃描
8. Odyssey軟件數(shù)據(jù)分析
9. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表