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全長(zhǎng)鳥槍法測(cè)序技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
基因測(cè)序的方法 是在獲得一定的遺傳及物理圖譜信息的基礎(chǔ)上，繞過bac克隆逐個(gè)排序的過程，將基因組dna分解成2kb左右的小片段進(jìn)行隨機(jī)測(cè)序，輔以一定數(shù)量的10kb的克隆和bac克隆的末端測(cè)序，利用超級(jí)計(jì)算機(jī)進(jìn)行整合進(jìn)行序列組裝。
系將大片段DNA(如噬菌體文庫中約40 kb長(zhǎng)或細(xì)菌人工染色體所含350 kb長(zhǎng)的DNA插入片段)隨機(jī)切成許多1～1.5 kb的小片段，分別對(duì)其測(cè)序，然后借助序列重疊區(qū)域拼接成全段序列。
優(yōu)點(diǎn)是速度快，簡(jiǎn)單易行，成本較低。但用它來測(cè)序，*終排序結(jié)果的拼接組裝不太容易。
全基因組鳥槍法測(cè)序的主要步驟是：
**，建立高度隨機(jī)、插入片段大小為1.6kb到4kb左右的基因組文庫?？寺?shù)要達(dá)到一定數(shù)量，即經(jīng)過兩端測(cè)序的克隆片段的堿基總數(shù)應(yīng)達(dá)到基因組大小的6到10倍。
**，高效、大規(guī)模的克隆雙向測(cè)序。
第三，序列組裝。借助Phred, Phrap, Consed 軟件進(jìn)行序列組裝，產(chǎn)生一定數(shù)量的contig。
第四，填補(bǔ)缺口。有兩種待填補(bǔ)的缺口，一是沒有相應(yīng)模板DNA的物理缺口，我們通過PCR的方法進(jìn)行填補(bǔ)；二是有模板DNA但未測(cè)到的序列缺口，我們直接在模板DNA上設(shè)計(jì)引物測(cè)序。
鳥槍法測(cè)序適用范圍：BAC、Fosmid、cosmid、線粒體DNA、葉綠體DNA等。
大致步驟
1.使用限制性內(nèi)切酶將帶有目的基因的DNA鏈切成若干小段。
2.再使用DNA連接酶將其整合到載體的基因中,并使其表達(dá)。
3.如果在某個(gè)細(xì)胞中得到了目的產(chǎn)物,就說明整合到該細(xì)胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段。
鳥槍法測(cè)序的缺點(diǎn)
隨著所測(cè)基因組總量增大，所需測(cè)序的片段大量增加，各個(gè)片段重疊或一個(gè)連續(xù)體的概率是2n2-2n
高等真核生物（如人類）基因組中有大量重復(fù)序列，導(dǎo)致判斷失誤。