關鍵詞:enogene
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公司簡介：enogene
一、原理
本CCK-8 細胞活力檢測試劑盒含有CCK-8，在電子載體存在的情況下CCK-8 被細胞內脫氫酶氧化還原后生成水溶性的橙黃色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細胞數量成正比。該無菌CCK-8 溶液可以直接加入到細胞培養(yǎng)液中；不需要預配其它成分。CCK-8 法是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法,可替代傳統(tǒng)的MTT 法。
二、試劑盒組成
目錄號組份規(guī)格儲存條件
E1CK- 000208-1 CCK-8 溶液1mL（100 *****s） 4℃避光，一年有效
E1CK- 000208-5 CCK-8 溶液5mL（500 *****s） 4℃避光，一年有效
E1CK- 000208-10 CCK-8 溶液10mL（1000 *****s） 4℃避光，一年有效
三、自備物品
低速離心機、酶標儀（450nm 波長）、平板搖床、微量移液器、96 孔培養(yǎng)板、CO2 培養(yǎng)箱
四、操作步驟
1. 在96 孔板中加入100 ul（約1×104）的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24 小時(在37℃，5% CO2的條件下)。
2. 向培養(yǎng)板中加入100 ul完全培養(yǎng)基或含有不同濃度受試樣品的完全培養(yǎng)基。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)一段適當的時間(例如: 48小時或72小時)。
4. 每孔加入10 ul CCK-8溶液(盡量不要在孔中生成氣泡)。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。
6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
7. 如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M HCl溶液或者1%（W/V）SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發(fā)生變化。
五、結果判斷
(1) 細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加CCK-8，無細胞），各重復孔的OD 值取均數±SD。
細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。
細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
(2) 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)或T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。