關(guān)鍵詞:細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://handsem.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
（Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit） 以MTT為指示劑，在經(jīng)典操作方法的基礎(chǔ)上，采用了獨(dú)特的甲簪溶解液，可以直接溶解甲簪，而無需離心去除原有的培養(yǎng)液，故可避免因甲簪部分被吸除而引起的操作誤差，具有本底低，靈敏度高，線性范圍寬，操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。  
保存條件 
    MTT溶液-20℃保存，一年有效；Formazan溶解液室溫或-20℃保存。 
使用說明 
    1. 細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，一般可在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行。 
    2. 每孔加入100微升細(xì)胞懸液。細(xì)胞的數(shù)量取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮团囵B(yǎng)時(shí)間。增殖實(shí)驗(yàn)每孔通常加入103個(gè)以上數(shù)量的細(xì)胞；細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔至少加入5x103個(gè)或以上數(shù)量的細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素確定）。 
    3. 接種的細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)需要，送入細(xì)胞培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。增殖實(shí)驗(yàn)通常要給予0-10微升特定的藥物或生長(zhǎng)因子進(jìn)行刺激。細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)通常要給予0-10微升抑制因子或細(xì)胞藥物； 
    4．培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入20微升MTT溶液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育3－6小時(shí)；   
    5．孵育結(jié)束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育，直至在鏡下觀察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小時(shí)左右，紫色結(jié)晶會(huì)全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大較多，溶解的時(shí)間會(huì)略長(zhǎng)。  
    6. 在570nm測(cè)定吸光度。如無570nm濾光片， 560-600nm范圍的濾光片均可使用。
步驟
1、接種細(xì)胞 :用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul。
2、培養(yǎng)細(xì)胞 :同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。
3、呈色 :培養(yǎng)3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對(duì)于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
4、比色 :選擇490nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
注意事項(xiàng)
1、選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度。
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗(yàn)。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。
3、設(shè)空白對(duì)照：與試驗(yàn)平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照。其他試驗(yàn)步驟保持一致，*后比色以空白調(diào)零。
MTT實(shí)驗(yàn)吸光度*后要在0-0.7之間，超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系，
IC50是半抑制率，意思是抑制率50%的時(shí)候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計(jì)算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)作圖，然后得到50%抑制率時(shí)候的藥品濃度，就是IC50。要點(diǎn)：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點(diǎn)線圖即可!