關(guān)鍵詞:全基因合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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全基因合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測序?qū)嶒?yàn)流程：
DNA是十分龐大的生物分子。病毒含有幾千到幾十萬個核苷酸，原核生物的DNA分子平均為10E6個堿基對，真核生物的DNA分子可達(dá)l0E9個堿基對。按每個基因平均為1000個堿基對進(jìn)行粗略的計(jì)算，大腸桿菌約有3000-4000個基因，而人類細(xì)胞的基因數(shù)目可高達(dá)200萬個。雖然其中某些基因，特別是真核細(xì)胞內(nèi)的一些基因是多拷貝的，在基因組內(nèi)有多個甚至極多個重復(fù)，實(shí)際基因數(shù)要比上述推算的基因數(shù)要少得多。盡管如此，原核細(xì)胞和真核細(xì)胞基因組內(nèi)的基因數(shù)目仍然是極為驚人的。
人工合成
由于研究某些基因或者某種蛋白的生理作用，例如生理活性等，因此，需要通過人工實(shí)驗(yàn)的方法合成一段全基因序列。
有效方法
經(jīng)過基因工程學(xué)工作者艱苦細(xì)致的探索研究，人們現(xiàn)在已經(jīng)掌握了分離和制造目的基因的一些有效方法。一般來說，目前獲取目的基因的方法主要有三種:反向轉(zhuǎn)錄法、從細(xì)胞基因組直接分離法和人工化學(xué)合成法，這些方法都有一個前提，就是已有文獻(xiàn)報(bào)道所研究的目的基因的蛋白序列或者基因的序列。
1、反向轉(zhuǎn)錄法
這種方法主要用于分子量較大而又不知其序列的基因，它以目的基因的mRNA為模板，設(shè)計(jì)上下游引物，借助反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補(bǔ)的DNA片段，即cDNA，再在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈cDNA，亦即目的基因的雙鏈DNA。
2、基因組擴(kuò)增法
利用基因組抽提試劑盒，可以從細(xì)胞、植物、血液、動物組織中直接分離基因組，設(shè)計(jì)特異擴(kuò)增的引物，利用抽提的基因組為模版，直接PCR擴(kuò)增，以獲取目的基因。
3、人工合成
依照某一蛋白質(zhì)的氨基酸序列，或基因序列，設(shè)計(jì)全長引物，利用OVERLAP方法形成模版DNA，再利用PCR擴(kuò)增的方法得到雙鏈DNA，然后將PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)化克隆至克隆載體或者表達(dá)載體中?；瘜W(xué)合成全基因目前是準(zhǔn)確率*高，速度*快的方法，同時可以依據(jù)密碼子在不同宿主細(xì)胞的偏愛性和不同的實(shí)驗(yàn)需求，設(shè)計(jì)基因序列，提高表達(dá)水平。